安徽省疾病預(yù)防控制中心毒理科病媒生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

　　背景：鼠類(lèi)不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康;而且通過(guò)嚙咬、盜食、污染等方式給工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失。在此背景下，通過(guò)深入細(xì)致的調(diào)研工作，了解鼠類(lèi)防制技術(shù)規(guī)范的現(xiàn)狀，并在遵循相關(guān)國(guó)家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，編制符合深圳市特點(diǎn)的鼠類(lèi)防制技術(shù)規(guī)范，有助于安全、有效地預(yù)防和控制鼠類(lèi)，保護(hù)人民群眾身體健康和生命安全，提升安徽省的環(huán)境衛(wèi)生水平。

　　一、材料和方法：

　　樣品來(lái)源于居民區(qū)及收治醫(yī)院周?chē)h(huán)境采集目標(biāo)病媒生物。160份鼠肺樣品來(lái)自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來(lái)自安徽等地。所有樣品均凍存于-80度待檢。

　　二、儀器及試劑：

　　1、凈信全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀

　　2、熒光定量PCR分析儀

　　3、高效病毒濃縮試劑盒

　　4、巢式RT-PCR所采用的引物,一步法RT-PCR試劑盒

　　5、RNA提取試劑盒

　　三、

　　1、樣品RNA的提取別取待檢鼠肺組織于全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負(fù)20度保存?zhèn)溆?，蜚蠊體表擦拭子中加入無(wú)菌生理鹽水少許于4度中過(guò)夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體10000r/min離心5min，其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進(jìn)行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負(fù)20度保存?zhèn)溆茫凑赵噭┖械恼f(shuō)明從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA于負(fù)20度中保存?zhèn)溆谩?/p>

　　樣品研磨前后效果圖

　　實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、準(zhǔn)備全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀。

　　2、金屬適配器，以及鋼珠適配器。

　　3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠。

　　4、將適配器裝入凈信研磨儀中，開(kāi)啟低溫功能保持溫度。

　　5、設(shè)定參數(shù)，啟動(dòng)儀器至研磨程序結(jié)束，可得到如圖所示樣品。

　　儀器介紹：

　　全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀：一種快速、高效、制冷的研磨系統(tǒng)。它能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤、植物和動(dòng)物的組織/器官、細(xì)菌、酵母、真菌、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨、粉碎、混合機(jī)細(xì)胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域。

　　優(yōu)勢(shì)：

　　研磨效果具有高度可重現(xiàn)性

　　觸屏操作，可存儲(chǔ)10條參數(shù)

　　能夠有效抑制核酸降解，保留蛋白質(zhì)活性

　　研磨時(shí)處于全封閉狀態(tài)，無(wú)交叉污染，低噪音

　　可輕松處理高韌塑料、高強(qiáng)塑料、樹(shù)脂等難研磨樣品

　　具備安全罩及安全鎖，無(wú)需涉及液氮操作，安全性高

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