一，骨組織切片及trap染色實驗步驟：

　　1、骨組織脫鈣要求：新鮮骨組織固定于4％多聚甲醛24h以上。將組織從固定液取出置于EDTA脫鈣液內(nèi)脫鈣（不能用含酸的脫鈣液脫鈣），每3天換一次脫鈣液，至骨組織針扎可以順利通過為止。

　　2、取材：在通風(fēng)櫥內(nèi)用手術(shù)刀將目的部位組織修平整，將修切好的組織和對應(yīng)的標(biāo)簽放于脫水盒

　　3、脫水：將脫水盒放進(jìn)吊籃里于脫水機(jī)內(nèi)依次梯度酒精進(jìn)行脫水。75％酒精4h-85％酒精 2h-90％酒精2h-95％酒精1h-無水乙醇I30min-無水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I5-10min-二甲苯II 5-10min-蠟I 1h-蠟II 1h-蠟iii 1h

　　4、包埋：將浸好蠟的組織于包埋機(jī)內(nèi)進(jìn)行包埋。先將融化的蠟放入包埋框，待蠟?zāi)讨皩⒔M織從脫水盒內(nèi)取出按照包埋面的要求放入包埋框并貼上對應(yīng)的標(biāo)簽。于-20°凍臺冷卻，蠟?zāi)毯髮⑾瀴K從包埋框中取出并修整蠟塊。

　　二，傳統(tǒng)方法

　　1.將骨標(biāo)本置于盛有脫鈣液的容器中放入小型臺搖床上（搖床振蕩為了更好的是脫鈣液和骨標(biāo)本充分接觸），每天更換一次脫鈣液。

　　2.傳統(tǒng)方法實物圖

　　三，小美超聲脫鈣儀脫鈣

　　1.產(chǎn)品介紹：小美超聲XM-202A超聲脫鈣儀是一款能使骨標(biāo)本快速脫去鈣質(zhì)的方法，采用獨(dú)特脫鈣液配方在超聲波引導(dǎo)下，實現(xiàn)快速而又安全地將磷酸鈣、磷酸鎂、碳酸鈣等晶體分子解體，在微波加速下完成 脫鈣、固定與中性緩沖過程，同時100%保存組織形態(tài)結(jié)構(gòu)和樣本的抗原特性，有利于后續(xù)進(jìn)行的抗原修復(fù)處理。整個過程具有定時控溫滿足不同實驗要求。

　　2.實驗步驟：將骨標(biāo)本置于盛有脫鈣液的容器中放入脫鈣機(jī)（注意脫鈣儀水槽中的水位要高于骨標(biāo)本脫鈣液的水位。）設(shè)好時間360h（15天），溫度37℃。

　　3.實驗實物圖：

　　4.實驗結(jié)果：將超聲15天的骨標(biāo)本切片后能滿意染色，組織無皺縮或腫脹等偽跡，保證制作成切片后的優(yōu)片率達(dá)95%以上，非常有利于后續(xù)的組織學(xué)處理，尤其是免疫組化染色，甚至滿足后續(xù)DNA檢測項目。

　　四，傳統(tǒng)方法(超聲波細(xì)胞破碎儀)和超聲脫鈣方法對比

　　1.節(jié)省脫鈣時間：使用快速脫鈣液骨髓穿刺、耳鼻軟骨組織脫鈣時間比常規(guī)脫鈣節(jié)省75%；對高密度的骨皮質(zhì)脫鈣時間比傳統(tǒng)方法縮短40%至60%。

　　2.樣品溫控：37℃（溫度可調(diào)）.可避免或緩解因組織與脫鈣液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生的升溫；超過攝氏50度時，還會破壞或改變骨標(biāo)本的顯微組織形態(tài)，影響實驗的準(zhǔn)確性。

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